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        尼康顯微鏡黃色激發塊TexasRedHYQ(帶通)的介紹

        作者:admin????發布時間:2020-07-05 11:47 ????瀏覽次數 :


            
            紫外可見和近紅外透射為尼康TexasRedHYQ高性能濾波器組合頻譜輪廓下面示于圖1.該濾波器組是一個兩尼康黃色激發組中,這兩者都采用的帶通發射(阻擋)濾波器而不是一個長通品種,以便限制從熒光團發射的量,組合優化的波長區域以外的干擾。在75納米發射窗(608至683納米)是結合了介質寬度(55納米)激發通帶(532至587納米),以允許選擇性地激發和檢測特定熒光團受歡迎,這是在多個標記實驗常用的。TexasRedHYQ濾波器組合配備有595納米(截止波長)長通二色鏡。
        尼康顯微鏡
         
            黃色激發濾光片座TexasRedHYQ規格:
         
            激發波長篩選:532-587納米(帶通,560CWL)
         
            雙色鏡截止波長:595納米(長通,LP)
         
            屏障過濾波長:608-683納米(帶通,645CWL)
         
            TexasRedHYQ濾波器組合被設計,以增加次級熒光的亮度,而不產生在信噪比的相應增加。更陡的通帶是通過增加在兩個激發和發射濾光片干涉腔的數量,從而使頻譜輪廓之間的更接近創建。所得更寬和更陡的濾波器通帶使該組,以提供更多的激發能量并捕獲熒光信號的更高的水平。該過濾器組合與流行的熒光探針得克薩斯紅色和CY3.5進行了優化,當單獨或多重標記技術被用于他們,并且也建議由黃色波長的激發熒光等應用。帶通發射濾波器功能,以減少或消除從熒光團發射的深紅色或近紅外光譜區的干擾。TexasRedHYQ濾波器組合被設計為尼康Y-2E/C組的較高的能量的變化,與更廣泛的激發和發射濾光器透射區域。它適合于用基本相同的組的探針的使用,同時提供對這些發光超出在Y-2E/C發射帶的上限改進的性能。(奧林巴斯顯微鏡)
         
            因為由膨脹激發和發射通帶區域允許增加的能量傳輸,與TexasRedHYQ集合產生的圖像通常是亮的并顯得比那些從類似Y2E/C組合更紅。TexasRedHYQ,CY3.5,氨基放線菌素D(AAD),酸性品紅,AlexaFluor568和594,茜素絡合劑,BOBO-3,BO-PRO-3,BODIPY:學習以下熒光當TexasRedHYQ過濾器設置建議,ROX(羧基-X-羅丹明),DiBAC4(5),HcRed,LDS751(結合的RNA),MitoTracker紅,MRFP-1(單體紅色熒光蛋白),naphthofluorescein,SYPRO紅,SYTO17(59,61,64),YO-PRO-3,和YOYO-3。在圖2中呈現的圖像表明具有多種針對不同細胞內位置黃色吸收熒光探針的這種過濾器組合的性能。
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            示于圖2(a)是從大鼠袋鼠腎(PTK2線)的上皮細胞進行免疫熒光標記與初級抗波形蛋白(一種中間絲蛋白)的小鼠單克隆抗體的培養的熒光發射隨后的山羊抗小鼠Fab片段結合到羅丹明紅。最大吸收羅丹明紅的是570納米,并且最大發射發生在590納米。角蛋白是一類形成單絲,中間絲的一種類型,存在于細胞骨架結構的水不溶性蛋白質。另外,將試樣同時染色用DAPI核DNA。注意沒有來自藍色熒光團(DAPI),其不能有效地由黃色光激發信號的,但是從羅丹明標記波形蛋白中間纖維網的高水平的紅色熒光強度。
         
            由薄小鼠腎臟的部分沾上多個(3)的熒光團的熒光發射強度顯示在圖2(b)。在組織切片細胞核靶向與核酸探針的DAPI,當在細胞培養物和組織切片結合到DNA,其具有最大激發在358納米,并且具有發射最大值在461納米。另外,低溫恒溫器部也同時沾上的AlexaFluor488麥胚凝集素(腎小球和曲小管)和AlexaFluor568鬼筆環肽(絲狀肌動蛋白和刷狀緣)。注意沒有信號的同時從藍色(DAPI)和綠(的AlexaFluor488)探針,但強烈的紅色熒光由于的AlexaFluor568中的肌動蛋白和刷狀緣的網絡的存在。
         
            印度麂的鹿皮沾上的AlexaFluor568綴合鬼筆環肽,其結合到細胞內絲狀肌動蛋白網絡的成纖維細胞的培養,示于圖2的(c)。最大吸收的AlexaFluor568的是578納米,并且最大發射發生在603納米的可見光譜的橙色區域。另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和MitoTracker綠FM(靶向線粒體;綠色發光)。注意沒有信號從綠色(MitoTracker)和藍色(DAPI)的熒光團,它們是不能有效地激發在黃色的波長,但明亮的橙紅色熒光的肌動蛋白絲發揮。
         
            圖2(D)展示了從HeLa細胞的培養即進行免疫熒光標記的同隨后綴合的AlexaFluor546的吸收最大值的Alexa的山羊抗-小鼠Fab片段初級抗組蛋白(鍋)的小鼠單克隆抗體的熒光發射強度氟546是556納米,并且最大發射發生在573納米(在可見光光譜的黃色區域)。第一抗體,從HeLa細胞的純化核級分生產,特異性結合的抗原決定簇,其存在于所有五個組蛋白(H1,H2A,H2B,H3和H4)。注意從兩個間期核和單核前期強勁的紅色熒光強度。
         
            大鼠胸主動脈(平滑?。┤旧募毎cMitoTracker紅CMXRos,其靶向細胞內的線粒體的網絡,在圖2(e)是示出。最大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米,并且最大發射發生在599納米。另外,將試樣同時用DAPI染色(在細胞核靶向DNA;藍色發光)和BODIPYFL-phallacidin(靶向肌動蛋白;綠色發光)。注意沒有信號從藍色(DAPI)和綠(BODIPY)熒光團,但明亮的紅色熒光被管狀線粒體發揮。
         
            由薄腳輪豆的部分自發熒光發射強度(蓖麻)組織表現出如圖2(f)所示。在植物組織中的內源性的自發熒光產生于各種生物分子,包括葉綠素,β-胡蘿卜素,葉黃素和。在黃色激發區域,葉綠素具有吸收帶具有低消光系數,但仍然產生熒光的檢測水平在580納米的發射波長和上述(橙色和紅色)。對于以上所說明的腳輪豆薄部分,注意自發熒光發射強度的在紅色光譜區的存在,但不存在強度中的低級(綠色和藍色)的波長。

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